El síndrome de Usher (USH) es una enfermedad autosómica recesiva que asocia hipoacusia neurosensorial, retinosis pigmentaria (RP) y, en ocasiones, alteración vestibular. Generalmente, en los estudios genéticos solo se analizan las regiones codificantes de los genes asociados a la patología. Sin embargo, en los últimos años se han descrito mutaciones en regiones intrónicas profundas que alteran el proceso de splicing, dando lugar a la inclusión de un pseudoexón (PE). Por ello, quisimos estudiar las regiones no codificantes de los genes USH en pacientes portadores de solo una mutación en heterocigosis.

Primero, analizamos las mutaciones intrónicas previamente descritas en 67 pacientes. Posteriormente, analizamos mediante secuenciación masiva los genes USH completos (exones + intrones) en 34 pacientes. Las variantes identificadas y clasificadas a nivel bioinformático como candidatas se estudiaron mediante ensayos funcionales con minigenes (debido a la baja expresión de los genes USH en sangre). En las variantes intrónicas profundas identificadas con efecto a nivel de minigene, se diseñaron varios oligonucleótidos antisentido (AONs) específicos de mutación con el fin de corregir el efecto aberrante producido en el splicing, y se probaron in vitro a diferentes concentraciones.

De los pacientes estudiados por Sanger, en 15/67 se identificó una mutación intrónica profunda descrita previamente. En los pacientes analizados mediante secuenciación masiva se identificaron cinco nuevas mutaciones en regiones no codificantes cuyo efecto patogénico en el splicing se demostró mediante estudios funcionales. Dos de las variantes se localizaban en regiones intrónicas profundas del gen USH2A y producían la inclusión de un PE en la región codificante. Para estas dos variantes y otra previamente descrita en USH2A se ha conseguido redireccionar el splicing mediante el uso de AONs.

Nuestro estudio refleja la importancia de analizar las regiones no codificantes en el diagnóstico genético del USH y la efectividad del uso de AONs como posible estrategia terapéutica.