AEGH2023

ESTUDIO COMBINADO DE GENOMA COMPLETO Y ANÁLISIS FUNCIONAL DEL ARN. IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UNA VARIANTE INTRÓNICA EN FBN1 Back
Poster Nº: P0235
Autores: Lucía Pérez Cabornero; David Hansoe Heredero Jung; María Jesús García Salgado; Elena Marcos Vadillo; Belén García Berrocal; Sandra Milagros Lorenzo Hernández; Raúl Gonzalez Panchuelo; Paloma Alonso Benavente; Pilar Carrero Baz; Beatriz Plata Izquierdo; Elena Díaz Peláez; María Carla Criado Muriel; Pablo Prieto Matos; María Isidoro García
Area: 12. Nuevas aproximaciones y tecnologías diagnósticas
 
01. Introducción y Objetivos: Breve introducción indicando el propósito del estudio.:

El estudio de Exoma Completo está dirigido a la identificación de variantes en la región codificante de los genes, pero no permite completar el diagnóstico genético en muchos casos, incluso tras su reanálisis. El objetivo de estudio es mostrar la aplicación del Genoma Completo (WGS) combinado con estudios funcionales para identificar variantes intrónicas que puedan ser responsables de la clínica del paciente.
02. Métodos: Descripción concisa de los métodos utilizados:

Presentamos una familia con tres generaciones afectas de Síndrome de Marfan, causado por variantes patogénicas en FBN1. La secuenciación del exoma no identificó variantes causales y se procedió a secuenciaciar el genoma de la probando y 4 familiares (2 sanos y 2 afectos) mediante la Plataforma NovaSeq 6000 (Illumina).

Evaluamos las variantes intrónicas mediante programas in silico (SpliceAI, NNsplice) y seleccionamos una variante relevante por su posible efecto en el splicing. Se llevó a cabo un ensayo funcional a partir del cultivo de linfocitos derivados del paciente. El estudio de expresión se realizó a partir del ARN mediante un análisis cualitativo y cuantitativo del patrón de isoformas de splicing mediante RT-PCR y secuenciación Sanger.
03. Resultados: Resumen de los resultados obtenidos:

La secuenciación del genoma identificó una variante intrónica profunda rara FBN1(NM_000138.4):c.7820-970C>T en el intrón 63, que segregaba con la enfermedad en la familia. La RT-PCR y la secuenciación del ARN de los fibroblastos del probando afecto revelaron la retención de 125bp del intrón 63, generando un cambio de tipo frameshift en la proteína (p.(Asp2607Glyfs*18)). Este resultado confirmó el diagnóstico en esta familia.
04. Conclusiones: Basadas en los resultados obtenidos:

La secuenciación del Genoma Completo permite identificar variantes claramente significativas en regiones intrónicas profundas, no detectadas con otras técnicas, permitiendo confirmar al diagnóstico, lo que constata la relevancia clínica de esta implementación asistencial. Estos hallazgos requieren análisis moleculares adicionales, como estudios funcionales de RNA, para evaluar su efecto sobre el transcrito.