Introducción: Indian Hedgehog (IHH) tiene un papel fundamental en el desarrollo esquelético. IHH es inicialmente sintetizado como un precursor proteico (pre-IHH), que posteriormente sufre una escisión auto-proteolítica generando dos péptidos: el péptido activo N-terminal (IHH-N), y el C-terminal (IHH-C), esencial para la autoproteolisis. Clásicamente, las variantes en heterocigosis en el dominio N-terminal se han asociado a braquidactilia tipo A1. No obstante, existe un número creciente de variantes identificadas en el C-terminal en pacientes con talla baja y/o braquidactilia. Sin embargo, se desconoce si estas variantes son patogénicas.

Objetivos: (1) Diseñar estudios funcionales rápidos para determinar la patogenicidad de variantes en IHH. (2) Determinar la patogenicidad de variantes en el C-terminal. (3) Estudiar el impacto funcional de variantes con frecuencia poblacional elevada de la base de datos gnomAD.

Generación de las variantes en IHH mediante mutagénesis dirigida en vectores de expresión y sobreexpresión en células HEK293. Estudios de secreción y niveles intracelulares de pre-IHH, IHH-N e IHH-C, mediante Western blot.

Todos los mutantes, independientemente de su localización, mostraron niveles muy reducidos o incluso indetectables (≥70%) de proteína secretada respecto de la silvestre. Paralelamente, se observó una reducción en los niveles intracelulares de los péptidos IHH-N e IHH-C sin que la síntesis del precursor se viese afectada. Inesperadamente, las variantes con una frecuencia relativamente alta en gnomAD, mostraron el mismo efecto sobre la secreción y el procesamiento que las de los pacientes

 (1) Las nueve variantes estudiadas pueden ser reclasificadas como patogénicas, siendo la disminución de la disponibilidad de péptido IHH-N activo secretado el mecanismo molecular responsable. (2) Los resultados obtenidos con las variantes de gnomAD sugieren tener cautela a la hora de excluir variantes frecuentes como posibles candidatas a explicar el fenotipo del paciente. (3) Se demuestra la importancia de realizar estudios funcionales para mejorar el diagnóstico genético.