El splicing es un proceso complejo en el que a partir de un pre-ARNm se eliminan los intrones y se unen los exones generando un ARNm maduro. En los pre-ARNm humanos se producen splicing alternativos resultando en distintas isoformas (transcritos). Determinadas variantes en el ADN pueden alterar este proceso dando lugar a transcritos aberrantes implicados en enfermedades humanas. En este trabajo se analizan los resultados obtenidos en estudios funcionales de ARN de una serie de variantes previamente identificadas en ADNg.

Se han estudiado 115 variantes mediante RT-PCR y secuenciación Sanger utilizando RNA extraído de sangre periférica. Se realizó un diseño de oligonucleótidos en los exones flanqueantes al exón/intrón en el que se localiza cada variante, se incluyeron al menos dos controles wildtype.

En 91 experimentos se obtuvo amplificación tanto en la muestra como en los controles. Para 49 variantes (54%) se detectó alguna alteración en el splicing, mientras que en 42 (46%) no se observó ningún transcrito aberrante. En un experimento no se consiguió amplificación en la muestra, pero sí en los wildtype, lo que podría deberse a una alteración en el splicing no detectable mediante este estudio. Para 3 variantes el gran tamaño del exón implicado no permitió obtener resultados. En los 21 restantes no hubo amplificación en la muestra, ni en controles probablemente debido a la baja expresión del gen en sangre. La mayoría de variantes en las que se detectó alteración del splicing afectan al sitio canónico donador o aceptor (79,6%), seguidas de missense (14,3%) y frameshift (6,1%). El efecto más observado es la pérdida de un exón (46,9%).

Aunque los estudios funcionales de variantes sobre ARNm mediante RT-PCR presentan limitaciones, resultan de utilidad aportando evidencias significativas que contribuyen a determinar su implicación en enfermedad. En esta cohorte se obtuvieron resultados concluyentes en el 80% de variantes.